研究目的
本研究旨在探究利用尿素提取骨胶原的实验方法,为骨胶原提取过程中的优化提供参考。
实验材料与方法
材料:骨粉、尿素、甘氨酸、氯化钙、有机磷酸酶。
1. 将5g骨粉切小块,加入250ml浓度为6mol/L的尿素中,用搅拌器均匀搅拌1小时,然后放置室温下静置过夜。
2. 第二天将悬浮液滤掉,留下过滤液,加入相应的甘氨酸和氯化钙,调节溶液的pH值至7.4,后加入一定量的有机磷酸酶。
3. 将溶液用温度为60℃的水浴加热,保持60℃恒温搅拌12小时。搅拌的目的是防止溶液表面形成膜。
4. 加入甘氨酸,减少尿素的浓度,使骨胶原聚集。
5. 将溶液过滤,骨胶原被滤出,用80%的乙醇洗涤,后用去离子水冲洗。检测洗涤液的UV吸光值,确保骨胶原的纯度。
实验结果与分析
根据实验结果,利用尿素提取骨胶原的方法可行,通过梯度冲洗,可以获得骨胶原。纯度较高,使其具有很好的应用价值。
提取骨胶原时,添加氯化钙的目的是为了促进骨胶原的形成,同时,添加甘氨酸可以聚集骨胶原。此外,有机磷酸酶的加入,有益于溶液中胶原的分离。
进行洗涤和检测所得的UV吸光值可以判断骨胶原的纯度。终,提取的骨胶原的纯度高,可用于制备一系列生物材料。
结论
在实验室中,利用尿素提取骨胶原的方法可行,优点在于提取过程简单,操作简便。同时,对提取过程中添加的化学试剂比例、分离条件等进行针对性探究,可以提高骨胶原的提取率和纯度。因此,尿素提取法可作为骨胶原提取的一种参考方法。
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