什么是软骨素酶解度
软骨素是一种聚糖的天然高分子,主要存在于軟骨、鱼鳔、鱼肚等动物组织中。软骨素酶就是能够将软骨素分解成低分子量的骨胶原肽和硫酸软骨素的酶。软骨素的生物活性主要来源于其分子量,因此软骨素酶解度可以作为评价软骨素提取物质的重要参数。
测定软骨素酶解度的方法
常规测定方法是通过比色法,测定软骨素的还原糖(如硫代糖醛酸)浓度以计算软骨素酶解度。在此基础上,发展出了一系列软骨素酶解度测定方法,以下介绍其中一种操作简单、精度较高的方法。
实验器材和试剂
实验器材:理化分析天平、磁力搅拌器及热水浴等。
试剂:软骨素、pH 6.8的磷酸盐缓冲液、酵素胶囊(含软骨素酶)、50%四乙醇。
实验步骤
1. 将0.4ml软骨素样品加入1.6ml pH 6.8的磷酸盐缓冲液中,混匀。
2. 向体积为1ml的酵素胶囊中加入1ml 50%四乙醇,混匀后加入样品液中。
3. 在热水浴中,以40℃恒温搅拌,反应15min。
4. 冷却样品至室温,加入3ml四乙醇,混匀。
5. 将样品离心3min,取上清液用四乙醇作稀释液,用比色法测定硫代糖醛酸浓度(λ= 520nm)。
计算方法
软骨素酶解度(%)= 2 * [含量检测浓度 / (理论含量 × 补偿系数)] × 100%。
其中理论含量为软骨素酶其可消化软骨素的高含量。在本实验中,含量检测浓度为硫代糖醛酸的浓度,补偿系数为 1.5。
实验注意事项
1. 特定品种和部位的动物软骨在组织构成、生物学特征、生长环境等方面存在差异,从中提取的软骨素也会有差异。
2. 软骨素酶解所需试组成分量和反应条件不同,可能导致软骨素酶解度的差异。
3. 实验操作中严格按照实验步骤操作,尤其是反应时间和反应温度应准确无误。
结论
软骨素酶解度是评价软骨素提取物质的重要参数之一,可通过比色法测定硫代糖醛酸浓度来进行计算。需要注意的是,不同来源、不同试组成分量和反应条件下,软骨素酶解度可能存在差异,应在实验设计时充分考虑。

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